频年来基于高通量测序平台的宏基因组二代测序（mNGS）技巧在再生儿熏染性疾病畛域得到了普及运用。为了越发样板mNGS技巧在再生儿重症监护病房的运用，中华医学会儿科学分会再生儿学组和中华儿科杂志编纂委员会机关老手以国表里循证医学凭据和最新希望为底子，从mNGS技巧的临床适应证、标本搜罗与转运、汇报解读等方面给出创议。一.mNGS在NICU熏染性疾病中的运用恒久以来再生儿熏染一贯是儿科医师面对的强大挑战，再生儿的免疫系统不行熟，易感成分多，在来往病原体时警备性能较为脆弱，致使相对高的病发率和病死率。由于再生儿熏染的临床显露不断不典范，病情较为藏匿、希望速即，疾速明白病原体对疾病的调理及转归非常要害。

共鸣1

患儿具备急危重症显露，不除外熏染，或有继发或并发危及性命的严峻熏染，需求只管明白病原体，创议向例探测的同时送检mNGS。

共鸣2

高度狐疑患儿存在再生儿血流熏染乃至败血症时，若阅历医治3d成就欠安且向例微生物学反省送检阴性，创议调度阅历抗微生物医治计划的同时搜罗血液模范送检mNGS。推举DNA测序做为血流熏染的首选探测法子，在高度狐疑RNA病毒熏染的环境下可同时实行RNA测序。

共鸣3

关于疑似中心神经系统（CNS）熏染的患儿，前提同意的环境下创议留取向例、生化及微生物反省所需脑脊液的同时留取mNGS所需脑脊液，若脑脊液反省效果提醒向例和(或)生化目标反常且向例微生物探测阴性且阅历性抗熏染医治3d失效，创议登时送检mNGS。脑脊液向例微生物反省的阳性率较其余表率模范低且脑脊液模范所含人核酸含量较低，是以脑脊液较合适开展mNGS探测。在测序法子的筛选上，若临床清除病毒熏染的也许，优先实行DNA测序。当脑脊液向例、生化无显然反常且脑脊液微生物学反省阴性，临床上仍高度狐疑CNS熏染，或临床显露繁杂、无特定狐疑方位送检mNGS时，推举对脑脊液模范DNA和RNA同时实行测序。

共鸣4

关于疑似呼吸道熏染的重症患儿，向例微生物反省(培育或核酸探测)阴性且医治3d失效，可送检mNGS，应同时实行DNA及RNA测序。模范表率优先筛选肺泡灌洗液，其次琢磨气管插管下得到痰液及鼻咽拭子模范。mNGS可对包含呼吸道定植菌群和引发熏染的病原菌同时实行探测，同时关于多重熏染的判断具备极大上风。mNGS技巧在保守病原微生物探测（包含培育、PCR等）阴性及免疫性能抵御的患儿中运用价格更高。

共鸣5

疑似新病发原体、临床上提醒也许有确定的感化性，或许疑似特别病原体或习见病原熏染，向例微生物探测法子阴性，创议只管美满mNGS。

共鸣6

疑似存在搀和熏染，向例微生物反省效果不能注解临床显露的全貌或抗熏染医治的反映，阅历性医治3d失效时，创议进一步美满向例探测的底子上，开展mNGS。比拟于向例法子有限的探测局限，mNGS的旨趣使得其具备更普及的探测局限，理论上能够探测搪塞病原微生物。这一特征使得其更易检出搀和熏染。

共鸣7

呈现某种熏染性疾病的聚合性病发或许疑似院内熏染爆发，在向例疾速探测不能明白病原时，创议开展mNGS。

共鸣8

疑似个别熏染，如眼部(角膜炎或溃疡、眼内炎、急性视网膜坏死等)、鼻部、耳部或个别蜂窝织炎等，在向例微生物探测未能明白病原环境下，可开展mNGS。

共鸣9

由于种种因为致使的胸腔积液及腹腔积液，在送检向例生化及培育的同时留取胸、腹腔积液模范，若向例、培育阴性或阅历性抗熏染医治3d失效，仍狐疑熏染而至者，创议登时送检mNGS。

共鸣10

关于mNGS探测阴性但临床高度狐疑熏染的患儿，须要时再次取样复查mNGS。

共鸣11

对向例微生物学反省轻易明白病原体且阅历医治时常有用的熏染，不创议向例实行mNGS探测。不创议运用mNGS评价抗熏染医治成就。图1为再生儿熏染性疾病送检mNGS的过程图注：a呼吸道熏染优先筛选肺泡灌洗液，再琢磨痰液和鼻咽拭子模范；b推举DNA测序做为血流熏染的首选探测法子，RNA病毒熏染不除外的环境推举RNA测序；关于呼吸道熏染，同时实行RNA和DNA测序；关于中心神经系统熏染，在清除病毒熏染的环境下，优先实行DNA测序；当狐疑病毒熏染或临床显露繁杂，无特定狐疑方位时，可同时实行RNA和DNA测序。二.标本搜罗和转运（一）模范搜罗临床上搜罗的模范表率要紧包含静脉血、脑脊液、痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液、腹腔积液、机关、咽拭子、局灶穿刺物等。不同表率的模范搜罗需听命下列绳尺。1.从无菌部位（如静脉血、脑脊液、胸腔积液、腹腔积液等）搜罗标本时，应严厉无菌职掌。搜罗后的标本须用无菌容器艳服。

血液：创议取1~3ml（不同测验室请求不同，最低限为0.5ml），采取专用采血管，即游离DNA模范保管管，采血后高低颠倒混匀5~10次；

脑脊液：向例创议应为1ml以上（再生儿因脑脊液模范较难得到，最低模范量为μl），采取专用采血管或无菌冻存管；

胸、腹腔积液：需富集后讨取核酸，最少搜罗5ml，防止经引流管搜罗；

若增进RNA测序时，需提早关连测验室供应增加RNA安定剂的采血管或无菌冻存管，在搜罗模范时须同时采2管；

若模范同时实行DNA及RNA测序，1管模范量为独自DNA测序的2倍，同时向探测测验室特别注明需登时实行核酸讨取。

2.从有菌部位（如痰液、肺泡灌洗液、咽拭子等）搜罗标本时，应筛选须要法子，严厉无菌职掌等，只管缩小玷污，免得扰乱后续探测效果；同时表明模范的搜罗部位。

肺泡灌洗液：应为3ml以上，采取无菌冻存管；

痰液：应为3ml以上，采取无菌冻存管；

咽拭子：只合用于呼吸道病毒探测。

共鸣12

种种型模范搜罗需求无菌职掌，血液、高凝状况的胸腔积液、腹腔积液、脑脊液模范，搜罗后需高低颠倒混匀5~10次。非血液标本搜罗时常采取带螺旋盖的无菌冻存管，但预期也许凝固的标本及血液模范需采取专用采血管。整个模范搜罗完结后，均需求封口膜密封，条码记号。

共鸣13

推举直接从患儿熏染部位的体液或机关中搜罗模范。

共鸣14

患儿存在熏染显露但病情危重或不本领受有创职掌时，可琢磨搜罗患儿的血液标本实行向例微生物法子探测的同时送检mNGS。

绳尺上，送检熏染部位的体液或许机关标本麻利度、稀奇度和可托度更高。有创职掌不耐受时，可送检血液标本，但也许会下降探测效果的明确性。有探索发掘，关于重症肺部熏染患者，痰液或肺泡灌洗液和血液标本探测病原体的一致性为40%~50%。

（二）模范转运整个模范均应实时送检。若模范在24h内抵达测验室并最先探测，可琢磨冰袋低温输送；若输送工夫24~72h，应干冰输送（血液模范应先离别血浆后保管输送）。不能实时送检模范恒久保管绳尺：（1）DNA测序为-20℃保管不超出7d；（2）RNA测序应置-80℃理论上可恒久保管；（3）防止模范一再冻融，正常不得超出3次；（4）若狐疑高致病性或突发感化病，严厉根据国内感化病法等关联司法请求包装及转运。病院生物平安防备前提下抽提核酸后再送测序。三.汇报解读mNGS由于检出效果丰硕，尽管抬高了病原微生物探测敏锐性，也对切确判读致病微生物构成了艰巨。创议由临床熏染或临床微生物学从业人员在关联的生物讯息学培训后实行解读。

共鸣15

解读mNGS探测汇报应参考探测法子的数据和检出病原序列数目、基因组遮盖度、微生物品貌等目标，联合标本搜罗部位、检出病原的致病特征以及患儿临床质料实行私人化解读。

共鸣16

源于微生物平常定植部位的标本(比方支气管肺泡灌洗液)，鉴识检出序列是属于致病微生物、玷污物，照样定植菌群较为艰巨，应归纳患儿临床显露及襄理反省归纳决断。

共鸣17

在再生儿全体中仔细运用mNGS实行耐药基因探测。惟独标从来历于无菌区(如血液、脑脊液)且标本搜罗过程玷污几率极低时，可琢磨探测耐药基因。创议探测单元筛选挑选具备要害临床意义的耐药基因实行汇报，意义不明白、扰乱临床解读的耐药基因应仔细汇报；创议临床对汇报的耐药基因仔细解读，归纳汇报病原菌、患儿根本环境、临床药敏效果等多个成分实行决断。mNGS技巧的胜利开展对部份熏染性疾病患者特为是免疫抵御人群及重症熏染人群的病原学诊断起到了打破性效用。基于mNGS具备无偏倚性、遮盖广、敏锐性高，历时相对较短等益处，特为可在搀和熏染或病毒熏染方面显露其上风，是以mNGS在再生儿熏染性疾病中具备雄伟的运用前程。诺禾致源PD-seq?病原宏基因组探测对疑似熏染患者模范中微生物和宿主的核酸实行高通量测序，能够无偏倚地探测+种病原微生物（包含细菌、真菌、病毒和寄生虫），经过与微生物基因组数据库比对和智能化的生物讯息学剖析，构成专科客观的汇报，与患者临床病症相联合，可襄理临床医师对患者的熏染环境实行诊断，并提议精确的用药计划。参考文件：中华医学会儿科学分会再生儿学组,中华儿科杂志编纂委员会.宏基因组二代测序技巧在再生儿熏染性疾病中的临床运用老手共鸣[J].中华儿科杂志,,60(6):-.END　　c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15c8.28,0,15,6.72,15,15　　c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15c8.28,0,15,6.72,15,15　　c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15s15,6.72,15,15c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12　　h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15c8.28,0,15,6.72,15,15c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68　　c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15c8.28,0,15,6.72,15,15c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68　　c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15s15,6.72,15,15c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12　　c0-8.28,6.72-15,15-15c8.28,0,15,6.72,15,15c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15　　c8.28,0,15,6.72,15,15c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15s15,6.72,15,15　　c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15c8.28,0,15,6.72,15,15　　c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15c8.28,0,15,6.72,15,15　　c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12h11.68c0-0.04-0.01-0.08-0.01-0.12c0-8.28,6.72-15,15-15s15,6.72,15,15c0,0.04-0.01,0.08-0.01,0.12H　　c8.28,0,15-6.72,15-15V0H0z">预览时标签弗成点收录于合集#个


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